ساخت وکتور آدنوویروسی بیان کننده ژن tbid تحت کنترل پروموتر میدکاین در رده ی سلولی hepg2

یکی از انواع سرطان های شایع در جهان، هپاتوسلولارکارسینوما می باشد که در حال حاضر درمان موثری علیه آن وجود ندارد. از راهکارهای درمانی نویدبخش، ژن درمانی با استفاده از وکتورهای آدنوویروسی است که برای انسان بی خطر می باشند. در این مطالعه سازه ی آدنوویروسی نوترکیب تولید شد که در آن یک ژن کشنده تحت کنترل پروموتر اختصاصی سلول های توموری قرار گرفت. میدکاین یک فاکتور رشد متصل شونده به هپارین است که در سلول های توموری بیان بالایی دارد. tbid ، ژن پروآپوپتوز، یک واسطه ی کلیدی در هر دو مسیر آپوپتوز، مسیر میتوکندریایی و مسیر وابسته به گیرنده ی مرگ می باشد. از توالی پروموتری میدکاین برای بیان اختصاصی tbid در رده ی سلول های hepg2 و القای آپوپتوز در آنها استفاده شد. ابتدا پروموتر غیر اختصاصی cmv از آدنووکتور شاتل حذف شد. قطعه mk-tbid در سازه ی pcmk-tbid با روش touchdown pcr تکثیر و سپس در آدنووکتور شاتل pad-?cmv-gfp کلون گردید. بیان موقت tbid با ترانسفکشن سلول های hepg2 با آدنووکتور شاتل pad-mk-tbid-gfp و روش rt-pcr تأیید شد. این آدنووکتور شاتل و پلاسمید اصلی آدنوویروس به طور همزمان به سویه bj5183 منتقل شد. سازه ی آدنو ویروس نوترکیب درنتیجه ی فرآیند همولوگوس ریکامبینیشن بین آدنو وکتور شاتل و پلاسمید اصلی آدنوویروس، ایجاد گردید که صحت این سازه با روش هضم آنزیمی با آنزیم های مختلف و pcr تائید شد. در مرحله ی نهایی با ترانسفکشن سلول های بسته بندی کننده hek 293 با سازه ی آدنوویروسی خطی شده، پارتیکل های آدنوویروسی نوترکیب تولید شد. تولید پارتیکل های آدنوویروسی با ظهور اثرات سایتوپاتیک و بررسی پلاک های gfp 5 تا 7 روز بعد از ترانسفکشن این سلول ها با میکروسکوپ فلورسانس تأیید شد.